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    Funakoshi新产品----AllView PAGE Buffer

    2021-04-29
    浏览次数: 71

    AllView PAGE Buffer是一种新型的SDS-PAGE蛋白电泳缓冲液。这款缓冲液具有一个显著的特点就是能够在碱性的Laemmli凝胶(Tris-HCl)中分离不同分子量大小的蛋白质,类似于梯度凝胶的使用。建议使用丙烯酰胺浓度为6%的分离胶和3%的浓缩胶,以分离分子量约在10 kDa250 kDa的范围的蛋白。电泳后的聚丙烯酰胺凝胶可直接用于CBB染色、银染或western印迹。


    产品特点:

    1. 节省成本和时间(不需要梯度凝胶

    2. 使用mini gel只需13分钟即可完成电泳

    3. 适用于之后进一步的分析实验:例如CBB染色、蛋白质印迹等

     

    操作步骤:

    1. 用超纯水将20×AllView PAGE Buffer稀释至工作液。(例如,取25 mlAllView PAGE Buffer475 ml 的超纯水中.

    2. 将凝胶放入电泳槽中。

    3. 1×AllView PAGE Buffer注入电泳槽中。

    4. 点样以及加入蛋白marker

    5. 开始电泳,电泳条件设置如下。



    Gel Voltage Time
    Mini gel (8 × 10 cm, 1 mm thick) 250 V (Constant voltage) 13-15 min



    注意:

    AllView PAGE Buffer适用于Laemmli凝胶(见下文推荐用法)。

    如果使用预制凝胶,则最佳丙烯酰胺浓度可能不同。

    AllView PAGE Buffer不可重复使用。

    AllView PAGE Buffer20×原液。使用前请稀释至1倍工作液。

    如果观察到SDS沉淀,使用前将其放在水浴(约37°C)中使其完全溶解。

    最佳电泳时间取决于丙烯酰胺浓度、凝胶大小和电压。

    建议使用MW Marker作为标记。(e.g. DynaMarker® Protein MultiColor Stable II, Code#DM660).

     

    推荐用法:

    建议丙烯酰胺的浓度为6%的分离胶和3%的浓缩胶,以分离分子量大概10 kDa250 kDa范围的蛋白。特别是在需要分离低分子量蛋白质(10kda~30kda)的情况下,建议使用10%的分离胶。

    1. 准备胶 (Laemmli’s method)  

    1,聚丙烯酰胺分离胶和浓缩胶配方(2 mini gels


    Stacking gel (6 ml)

    Resolving gel (15 ml)

    Gel percentage

    3%

    6%

    10%

    Ultrapure water

    3.9 ml

    8.05

    6.05

    1.5M Tris-HCl (pH8.8)

    1.5

    3.75

    3.75

    30% Acrylamide/Bis solution

    0.6

    3.0

    5.0

    10% SDS

    0.06

    0.15

    0.15

    TEMED

    0.003 (3 µl)

    0.00375 (3.75 µl)

    0.00375(3.75 µl)

    10% APS

    0.06

    0.05

    0.05

     Funakoshi新产品----AllView PAGE Buffer

    上图为 DynaMarker® Protein MultiColor Stable II, Code#DM660

     

    2.电泳图

    AllView PAGE BufferLaemmli electrophoresis running bufferTris-Glycine-SDS)的使用区别在于蛋白质迁移率不同。通过对AllView PAGE BufferLaemmli gelTris-HCl)的结合使用,可以像梯度凝胶一样分离大范围的蛋白质大小,如下图。

     Funakoshi新产品----AllView PAGE Buffer

    订购信息:

    货号

    产品名称

    规格

    DS520

    AllView PAGE Buffer

    500 ml (20 × stock solution)

     


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